革蘭氏染色的問題 - 藥品

By Kyle
at 2008-10-26T00:00

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做革蘭氏染色為什麼要採用18~24小時培養的菌液？作革蘭氏細菌時抹片來回通過火焰加熱之目的為何？若加熱不夠或過度，會造成何種影響？

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By Ethan
at 2008-10-30T06:25

革蘭氏染色是用來鑑辨細菌的一種方法，細菌細胞壁上的主要成份不同，利用這種染色法，可將細菌分成兩大類。這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(1853年-1938年)於1884年所發明，最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。
革蘭氏染色的對象是細菌的細胞壁。染色後的細菌可在顯微鏡下更好的觀察，以便於區分。
該染色法是以丹麥醫生和細菌學家漢斯·克里斯蒂安·革蘭（Hans Christian Gram）的名字命名的，他在19世紀末發展出這一方法。
不同的細菌在該染色法的作用底下反應不同，借以區分成為兩類：
革蘭氏陽性細菌, 胞壁染色後呈藍紫色
革蘭氏陰性細菌, 染色後呈紅色。
這是辨別細菌種類的一個重要特性，對由細菌感染引起的疾病的臨床診斷及治療很有幫助。
"革蘭氏陽性"細菌和"革蘭氏陰性"細菌對抗生素的反應並不一樣。通過抽取樣品醫生可以在很短的時間內（5分鐘左右）確定細菌的革蘭氏性質。這樣，醫生就可以迅速的給病人注射抗生素，而不需要等待通過細菌培植得到的化驗結果，這往往需要幾天時間。
流程可概括為：染色-脫色-複染。
第一步初染劑（Primary Stain）：使用結晶紫染色。
第二步媒染劑（Mordant）：加入複方碘溶液或稱革蘭氏碘液（Gram's Iodine）後會形成不溶性的結晶紫-碘（CV-I）複合體。細菌呈紫黑色。第二步是關鍵，它的目的是分辨細菌的革蘭氏染色特性。若為革蘭氏陽性菌，此複合體係結合於細胞壁之鎂、核糖核酸組成（Magnesium Ribonucletic Acid），形成鎂-核糖核酸-結晶紫-碘（Mg-RNA-CV-I）複合體，不易脫去。
第三步脫色劑（Decoloring Agent）：使用酒精（95%）脫色，試劑具脂溶劑（Lipid Solvent）和蛋白脫水劑（Protein Dehydrating Agent）之雙重功能。此步驟對革蘭氏陽性細菌無效，因為細胞壁上厚厚的細胞壁層阻隔了結晶紫-碘複合體的外滲，只能留在細菌體內。革蘭氏陰性菌細胞壁層薄，會被脫色而成為無色。
第四步複染劑（Counterstain）：為了對比，在此之後會加入番紅（Safranin）進行複染，革蘭氏陰性菌成紅色，而革蘭氏陽性菌仍保有原來的紫色。
KOH-試驗
另外的一種方法是氫氧化鉀-試驗。將培養好的細菌取出一小部分，使其懸浮於一滴KOH溶液中。革蘭氏陽性菌與之不發生反應，用細針穿過該溶液，溶液呈正常液體狀。革蘭氏陰性菌胞壁太薄，無法抵抗鹼液的侵蝕。細菌體被破壞，DNA溢出，溶液粘性上升。用細針穿過溶液，可以看到溶液中布有絲狀物質。
2008-10-27 03:01:14 補充：
藥品
結晶紫:作為初染劑
碘液:作為媒染劑
酒精:濃度為95%，作為脫色劑
番紅:複染劑
實驗器材
實驗菌種、接種環、蒸餾水、玻片、酒精燈、吸水紙、顯微鏡
2008-10-27 03:01:47 補充：
實驗步驟
將菌種抹於玻片上，並置於酒精燈上加以熱固定。
將結晶紫滴於玻片上，靜置一分鐘後用蒸餾水洗去多餘的結晶紫。
將碘液滴於玻片上，靜置一分鐘後，用蒸餾水洗去多餘的碘液。
酒精脫色，直至無結晶紫的顏色流出為止。
2008-10-27 03:02:04 補充：
以番紅複染，約45秒後用蒸餾水洗去。
用洗水紙將多餘的水吸乾後，即可置於顯微鏡下觀察。
注意事項：
以酒精燈烘乾玻片時，應避免熱源持續對同一點加熱，以免玻片破掉。
以蒸餾水洗去多餘藥品時，應避免直接沖洗到樣品的位置，可將玻片與水平面呈一個角度，使蒸餾水由玻片較高處往樣品處流去。
此實驗的標準作法應於無菌的狀態下操作。
本實驗可以大腸桿菌和金黃葡萄球菌作為控制組。
實驗結果
革蘭氏陽性菌呈現紫色，或更深的藍黑色。
革蘭氏陰性菌呈現粉紅色或紅色。

By Heather
at 2008-10-28T05:33

1.做革蘭氏染色為什麼要採用18~24小時培養的菌液？
宜使用未超過24小時之新鮮培養，置備抹片。因菌齡老化，尤以革蘭氏陽性菌易失去保留初染之能力，而顯示出錯誤的結果。且部份菌體染呈紫色，部份呈紅色。
2.作革蘭氏細菌時抹片來回通過火焰加熱之目的為何？
使細菌易固定在玻片上
3.若加熱不夠或過度，會造成何種影響？
加熱不夠則細菌不易固定在玻片上加熱過度則會造成細菌結構變形

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