L929的培養誰會,教教我吧 - 藥品

By Enid
at 2008-07-22T00:00

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目前在公司負責培養L929細胞株,基本細胞培養已有概念但針對此細胞株卻一知半解,缺乏判別何種型態是死亡或有微生物污染,感謝不盡

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By Anonymous
at 2008-07-26T18:31

你是不是在作類似這種的：
實驗進行前2-3天，將L929細胞株由25T培養皿轉入75T培養皿中大量培養，待L929細胞株於培養皿中形成單層細胞後才開始進行實驗。實驗進行的第一天，收集培養皿中log生長期的細胞並離心（1500rpm，10分鐘），將細胞稀釋成2.5x105/ml，取100μl/well的細胞加入96孔培養盤中，於37℃、5%CO2培養箱中培養18-24小時。第二天，確定培養盤中的細胞已形成單層細胞後，先加入10μl/well Actinomycin-D（60μg/ml）抑制L929細胞的增殖作用，再分別將待測的細胞上清液或TNF 標準品（0-100U/ml）加入，繼續培養24小時。第三天，以PBS去除培養盤之上清液及未貼附的細胞，再加入50μl/well stain solution（20% formalin + 0.2% crystal violet）於室溫中作用20分鐘，以自來水浸泡培養盤數次，去除多餘的染液，風乾。第四天，加入100μl/well PBS/Ethanol solution（1：1）溶解細胞，測定波長570nm吸光值，所得之吸光值對照標準曲線求TNF濃度。
我知道一點點，培養的時候最容易被酵母菌污染，去找圖鑑就有了。
另外簡單的方法就是加抗生素下去，嘿嘿嘿，菌落會被抑制，L929我不知道會不會被搞死，但是抗生素對真菌以及細菌、酵母的殺傷力都很大，濃度的話要請你們自己試，用純化的L929下去慢慢試。
被微生物污染之後，培養基(液)被分解的速度會變快，若是懸浮培養的話，培養基被嫌氧菌染的機會比較大，固體培養基是好氧菌比較大，我記得課本裡面有，可以去查一下，我的電腦中了奇怪的毒，筆記都不見了，這個人家有學溜，忘光光了，嗚嗚嗚......

By Mary
at 2008-07-25T08:19

非常感謝你呢。有關細胞培養的書籍或圖鑑能否推薦呢？謝謝！

L929的培養誰會,教教我吧 - 藥品

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