生物技術的問題,對這方面很拿手的進來看看!! - 抗生素

By Joe
at 2007-03-13T00:00

Table of Contents

麻煩一下,對這方面較不拿手^^,想對一下答案!!
1.有哪2種方法能將細菌轉形?請說明之
2.已知宿主細胞E.coli XL1-Blue具tet(r),而質體p(bluescript)具amp(r),何以轉形細胞可存活於同時含有tet、amp抗生素之LB agar,而原宿主細胞則否?
( )為上標

Tags: 抗生素

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By Charlie
at 2007-03-13T21:41

您好：
圖片參考：http://tw.yimg.com/i/tw/blog/rte/smiley_1.gif
　　關於您所提到與「生物技術之基因選殖」相關的問題，在此還是先概要地介紹一下有關基因選殖中的勝任細胞（competent cell）的發展背景，或許可以更加清楚地來解釋哦！　
　　其實在細菌彼此之間是可以相互傳遞質體的，這可以視為細菌突變的一項來源之一，就好譬如說一個攜帶有抗藥性基因質體的細菌，在自然的情況之下，這個細菌除了會不斷地分裂以產生具有抗藥性的後代之外，其也可能會再藉由接合現象（conjugation）或其它方式來將質體傳給別的細菌，於是其它的細菌也會帶有抗藥性了！
　　但是重點來了，當在進行基因選殖時，研究人員不可能利用自然發生的接合現象來完成細菌的轉形步驟嘛！因此，今若要利用其它的人為方式來使細菌的細胞壁組織發生改變以增加細胞膜的通透性，可以更容易地讓質體進入，就要利用勝任細胞來進行轉形了！
　　而勝任細胞的原文意思，係指這種細胞對於接受外來質體DNA的能力足以勝任，故而稱之。此種細胞是經過特殊處理的細菌，通常是大腸桿菌，為了將DNA順利送入大腸桿菌細胞，就必須馴化細菌，使其易於從外界環境中接受外來質體DNA的能力，這是製備勝任細胞的主要目的。
那到底有哪些方法能將細菌轉形呢？
　　目前一般實室內較常用的兩種方法為CaCl2化學處理以及利用瞬間電流打洞的電穿孔（electroporation）。
(1)化學方式－ CaCl2 Transformation
細胞膜會因CaCl2 而通透性增加，短時間的瞬間熱處理，DNA 就會被細菌吃入。以氯化鈣的處理後的勝任細胞，磷脂雙層膜產生破損，這時利用熱休克（heat shock）方式處理，就是先42℃處理使破損的地方熱漲變大，DNA這時比較容易進入，然後再以低溫使洞冷縮起來，降外來DNA就可以進入細菌中。
(2)物理方式－電穿孔
電穿孔法顧名思義，就是利用電流在膜上打洞（譬喻式說法），將目標的DNA送進細菌中的意思。由連續的低張溶液處理，再利用瞬間電流使細胞膜暫時通透，可把DNA送入細菌中，有80%的細菌具有轉型能力，許多將DNA送入細胞的技術都可能會用到它。
至於有經過轉形處理的細胞可以存活於同時含有tet、amp抗生素之LB agar中，但是原宿主細胞卻無法生存呢？
　　其實簡單來說，這就是基因選殖的抗生素篩選。能夠存活下來的細菌表示帶有外來質體DNA，其是因為有經過轉形的宿主細胞中，除本身具耐抗生素tet(r)的基因外，另又攜帶有含耐抗生素amp(r)基因的質體DNA，故可以存活於同時含有tet、amp抗生素之LB agar中，而沒有轉形成功的宿主細胞，因為其沒有再另外攜帶含耐抗生素amp(r)基因的質體DNA，故其自然就無法生存囉！
　　以上資料提供給您參考看看囉！希望對您有所助益，若還有不足或錯誤之處，再惠請知識專家們不吝補充與指正囉！歡迎來到我的無名參觀指教囉！amino的網誌首頁
2007-03-22 10:13:24 補充：
amino的小叮嚀~~
但願大大能在到期日前解決此問題!
不然您除了會被扣知識點數之外,此問題還有可能會被系統移除哦!
因為辛苦的回答不希望白費!再次感謝您~~

生物技術的問題,對這方面很拿手的進來看看!! - 抗生素

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