細胞分子實驗問題 - 抗生素

By Andrew
at 2007-10-10T00:00

Table of Contents

一、medium 內所加入的血清跟抗生素
1. 為什麼血清要去補體?
2.抗生素 Penicillin/streptomycin 要加多少的 unit ?
二、tryspin-EDTA 為什麼要用PBS稀釋，而不是用純水稀釋呢?

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By Isla
at 2007-10-14T13:46

1. 為什麼血清要去補體?
在進行免疫學研究、培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，應該去補體。因為補體可促進細胞溶解，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。
並不是每一種細胞培養都需要去活化補體。經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因爲高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沈澱物的形成會顯著的增多，這些沈澱物在倒立顯微鏡下觀察，像是 "小黑點"，常常會讓研究者誤以爲是血清遭受污染，而把血清放在37C環境中，又會使此沈澱物更增多，使研究者誤認爲是微生物的分裂擴增。
所以若非必須，不需要做熱處理。如此一來，不但節省時間，更確保血清的質量。
2.抗生素 Penicillin/Streptomycin 要加多少的 unit ?
通常Penicillin為100 U/mL，Streptomycin為0.1 mg/mL。但不同的細胞有時會不同，可以問之前培養這株細胞的人，他加的量是多少。
剛篩選出的細胞，如果沒有污染，其實是可以不加抗生素的。但由於細胞容易污染，培養一段時間之後，常常不得不加。有的人是一開始為了方便或實驗順利，就加一定濃度的抗生素，這種習慣其實不好。試想，如果你們實驗室投出的Paper，細胞株沒有加抗生素，其他人對你們實驗室的素質，會不會有較高的評價？
3.tryspin-EDTA 為什麼要用PBS稀釋，而不是用純水稀釋呢?
PBS是對細胞等滲透壓的緩衝溶液。動物細胞沒有細胞璧，碰到純水會立刻脹破，所以一切細胞培養相關的溶液，都必須等張。

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