DNA重組技術--藍白細胞篩選法 - 抗生素

篩選方式有很多種...
抗生素篩選,藍白篩選,養分篩選...
為什麼會用這些方式篩選...?
是因為轉殖基因到細胞或細菌時...所使用的載體
載體不同,篩選方式也不同...
載體的必備條件...
1.具有能夠表現轉殖基因的promoter...
2.具有能夠自我複製的複製起始點...
3.基因接入點(Multiple cloning site)
4.具有篩選時,需要的marker gene...
這個marker就是決定要如何篩選的依據...
大多數載體都會帶有抗抗生素的基因...
例如以下是pCMV-TAP 的map
圖片參考：http://www.narrador.embl-heidelberg.de/GroupPages/...
我們可以在map中看到kan r/neo r
kan 是指抗生素 kanamycin, neo是指neomycin...,r是resistance ...
表示這個載體所帶的抗藥性基因是可以抵抗kanamycin和neomycin的抗藥基因...
帶有這個載體的細菌可以抵抗kanamycin和neomycin...
帶有這個載體的細胞可以抵抗G418和neomycin...

而藍白篩選是因為所使用的載體中,
帶有lacZ基因...可以產生β-galactosidase ...
然後我們可以在培養基中加入X-gal solution...
當X-gal遇到β-galactosidase ...發生作用
圖片參考：http://upload.wikimedia.org/wikipedia/en/5/5b/X-ga...
產生藍色的產物沉澱...
所以我們可以在帶有這個載體的細胞或細菌上,呈現藍色...
例如以下這個載體...
圖片參考：http://www.qbiogene.com/products/gene-expression/q...
帶有lacZ基因...
當送進細胞後,就能用x-gal呈色...
帶有這個載體的會呈現藍色...
還有一個營養篩選...
你有需要再補充吧...
希望對你有幫助
2007-11-01 00:10:06 補充：
lacZ基因lac operon的三個 structural genes之ㄧ
lacZ基因經過轉錄轉譯產生β-galactosidase ...
用來水解 β-galactosides,並將β-galactosides分解成 monosaccharides...
而X-gal其實是屬於galactoside...
X-gal的全名是5-bromo-4-chloro-3-indolyl- beta-D-galactopyranoside...
會被β-galactosidase 水解...成兩個次單位...
2007-11-01 00:10:13 補充：
所以上面那張圖的意思是
X-gal遇到β-galactosidase ...會將其水解成兩個次單位
產生5-bromo-4-chloro-3-hydroxyindole 和galactose
5-bromo-4-chloro-3-hydroxyindole 會很快的氧化產生 5,5'-dibromo-4,4'-dichloro-indigo...
5,5'-dibromo-4,4'-dichloro-indigo是非水溶性的藍色沉澱...
所以細胞或細菌可以顯現出藍色...作為篩選依據
2007-11-01 00:16:00 補充：
注意這兩個字喔
β-galactosides...這是半乳糖苷
β-galactosidase...這是 半乳醣苷酶
別看錯了
字尾是-ase的字通常是酵素名稱....

抗生素法　
就是選沒有抗藥性的細胞　＆　
選有抗藥性的載體
這樣　沒抗藥性的細胞　只有被殖入有抗藥性的載體　才有抗藥性　才能存活下來　
沒有被殖入的　自然就被淘汰掉了～　
藍白細胞篩選　
主要在　載體是否被接上DNA　
有被接上DNA的　不會產生藍色　
沒被接上DNA 的載體　就會被染成藍色　
所以　通常在篩選　是否接上DNA 實驗時　
兩個過程是同時進行　
即　洋菜膠裡　既加了抗生素　也加了染色劑　
這樣　一方面篩選掉不要的細胞　能夠確定　有載體殖入細胞內
也同時也篩選掉沒有接入DNA的載體　容易選擇　你DNA 確實接入載體的細胞